あやねさんが書かれているように、プレートリーダーが原因なのか、
8連が原因なのかまず切り分けたほうがいいと思います。
プレートをいつもと上下反転で分注すれば、
A列にいつも添加してるとすれば、H列に添加することになるので、
この状態で測定して、A列ではなくH列がおかしな数値になるなら、分注が原因。
A列がおかしな値ならばリーダーが原因。
リーダーが原因ならば全部空Wellでの測定でどんだけ値に誤差が出るか。
次にDWだけ測定容量入れたときの誤差はどれくらいかなどを見た上で、
メーカーに相談してキャリブレーションしてもらったほうがいいかと思います。
分注が原因だとしたら・・・
ピペットで吸い上げるときに液面に対して垂直で入れてますか?
多くなってしまう側が傾いていれば変わる気もします。
校正されたのがいつかはわからないですが、
リークチェックやOリングのチェック等してみるのもいいかと思います。
一人の人が使ってるわけでないと、どっかで落とされたりしてて壊れてることもないとは言えないので。
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投稿を表示>端の1wellだけ
一列全部がおかしいのか、それとも角(かど)の1wellだけなのでしょうか?
まりれんさんやAyaneさんが書いておられたように、「橋はつかわない」選択もありかと思います。
ただ、他の人が同じ現象で困っていた時にアドバイスできるので検証してみるのもよいかもしれません。
くわしい実験内容がわからないので一般的なことを書いてみます。
・8連を疑うなら、まずは水を吸って秤量してみる。
・8連もシングルのマイクロピペットと同じく、3回リンスしてから垂直にすいあげて吐き出す。泡立ちやすい液やすこし粘性がある液の場合は完全に押してから吸い上げ、一段吐き出すと誤差が少なくなる。
・8連メーカーの純正チップでない場合、チップ装着したとき先端の高さが揃わないものがあります。
・まりれんさんが書いておられた通り、マイクロプレートリーダーは、機種によってはプレートの種類や大きさ、穴の位置を細かく設定する仕様になっているので、このへんの条件設定があっているか確認されたほうがいいかと思います。
・吸光度測定する前になにか反応させて加温しているのであれば、熱のまわりがちがうことが考えられます。また、角を手で持っているとか、そういうことはありませんか?
・Plate Washerを使っているなら、全部の列がちゃんと洗えているか確認してみてください。
(ちなみに古い機器をだましだまし使っている私の所属ラボでは、ノズルが詰まって洗えていないことがあり、油断できません)
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投稿を表示8連ピペットを使ったときにだけで起こる現象でしょうか?
96wellを使う実験、たまにプレートの1番端っこだけ数値がおかしくなることがあるので、あえて端は使わないって人もいます(実験内容によると思いますが)
プレート関係なく、8連の端っこのみで起こる場合はチップがうまくはまっていても液を吸うときにチップの先端が液面にうまく均等に浸ってないなどの原因も考えられるかも。
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