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おしえて!専門家

2023/12/23 00:09

解決済み 8連ピペットのコツについて

8連ピペット(マルチチャンネルピペット)をお使いの方いらっしゃいますか?
友人から8連ピペットを使って96wellプレートに液を分注すると、端の1wellだけ吸光度が高くなると相談を受けたのですが、私はチップがうまくはまってなくて液が十分に吸えないということはあっても、その逆の現象は起こったことがなくて。
一応ピペットは校正はされてるみたいなのですが、何か考えられる要因はありますか?

ベストアンサー

まりれん バッジ画像
2023/12/23 11:14

あやねさんが書かれているように、プレートリーダーが原因なのか、
8連が原因なのかまず切り分けたほうがいいと思います。
プレートをいつもと上下反転で分注すれば、
A列にいつも添加してるとすれば、H列に添加することになるので、
この状態で測定して、A列ではなくH列がおかしな数値になるなら、分注が原因。
A列がおかしな値ならばリーダーが原因。

リーダーが原因ならば全部空Wellでの測定でどんだけ値に誤差が出るか。
次にDWだけ測定容量入れたときの誤差はどれくらいかなどを見た上で、
メーカーに相談してキャリブレーションしてもらったほうがいいかと思います。

分注が原因だとしたら・・・
ピペットで吸い上げるときに液面に対して垂直で入れてますか?
多くなってしまう側が傾いていれば変わる気もします。
校正されたのがいつかはわからないですが、
リークチェックやOリングのチェック等してみるのもいいかと思います。
一人の人が使ってるわけでないと、どっかで落とされたりしてて壊れてることもないとは言えないので。


まりれん バッジ画像
2023/12/23 11:40

ちなみに私はガチ実験のときは外周一周基本使いません。
今のリーダーはプレートの中心で読んでくれてる(他箇所読みも可能)ことはわかってるのですが
プレートの枠外の隙間とか厚みによって測定値が微妙に変わると言われているので、
(そういうのに対応したプレートも増えている)
ガチのときだけサンプルは絶対に外周に入れない。
どうしてもウェルが足りないときは検量線用の列を外周に持ってくる。としてます。

まいまい
2023/12/24 10:34

ありがとうございます。
ELISA等だと私もプレートの端は使わないのですが、ただ吸光度測るだけなら変わらないのではと思ってたので勉強になりました。
友人のラボの状況がよくわからないので、とりあえずプレートリーダー側が原因か分注操作が原因か調査するように勧めてみます。あと精製水で8連の1箇所ずつ検定してみればとも伝えてます。

2 件の回答 (新着順)
ショウボ
2023/12/25 01:19

>端の1wellだけ
一列全部がおかしいのか、それとも角(かど)の1wellだけなのでしょうか?

まりれんさんやAyaneさんが書いておられたように、「橋はつかわない」選択もありかと思います。
ただ、他の人が同じ現象で困っていた時にアドバイスできるので検証してみるのもよいかもしれません。

くわしい実験内容がわからないので一般的なことを書いてみます。
・8連を疑うなら、まずは水を吸って秤量してみる。
・8連もシングルのマイクロピペットと同じく、3回リンスしてから垂直にすいあげて吐き出す。泡立ちやすい液やすこし粘性がある液の場合は完全に押してから吸い上げ、一段吐き出すと誤差が少なくなる。
・8連メーカーの純正チップでない場合、チップ装着したとき先端の高さが揃わないものがあります。

・まりれんさんが書いておられた通り、マイクロプレートリーダーは、機種によってはプレートの種類や大きさ、穴の位置を細かく設定する仕様になっているので、このへんの条件設定があっているか確認されたほうがいいかと思います。

・吸光度測定する前になにか反応させて加温しているのであれば、熱のまわりがちがうことが考えられます。また、角を手で持っているとか、そういうことはありませんか?
・Plate Washerを使っているなら、全部の列がちゃんと洗えているか確認してみてください。
(ちなみに古い機器をだましだまし使っている私の所属ラボでは、ノズルが詰まって洗えていないことがあり、油断できません)


まいまい
2023/12/26 23:02

ありがとうございます。
その子が今困ってるのは8連ピペットの教育訓練で、単純に色のついた水溶液を96wellに移して吸光度を測っているだけなので、操作の難易度は普通の実験に比べて低いかと思います(質問に書いておけばよかったですね…)
書いてくださった点で何か影響しそうなポイントないか確認してみます。チップの高さの微妙な違いとか怪しいかも知れません。

Ayane
2023/12/23 05:23

8連ピペットを使ったときにだけで起こる現象でしょうか?
96wellを使う実験、たまにプレートの1番端っこだけ数値がおかしくなることがあるので、あえて端は使わないって人もいます(実験内容によると思いますが)
プレート関係なく、8連の端っこのみで起こる場合はチップがうまくはまっていても液を吸うときにチップの先端が液面にうまく均等に浸ってないなどの原因も考えられるかも。


まいまい
2023/12/23 09:20

ありがとうございます!
プレートの確認は来週やってもらう予定です。やっぱ端を避ける流派あるんですね。
吸う時に液面は確認してるそうなのですが、ブレは数%らしいので少しの違いが影響してる可能性はありそうです。